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500色度溶液在340nm~360nm波长范围内的吸光值变化,得到最大波长为352nm。法纯配置100、化迷200、迭香300、酸研400和500色度的溶剂溶液,在352nm处测吸光度值为0.175、法纯0.382、化迷0.543、迭香0.694、酸研0.872,溶剂得回归线性方程为:Y=0.001x+0.021,法纯R2=0.997。化迷
分别用15%乙醇和纯水溶解含量为90%的迷迭香酸样品配制成0.2mg/mL样液,加入等体积的酸研正丁醇进行萃取,各重复3份,测定上下相中迷迭香酸的含量,结果如下表所示:
由试验数据可知:正丁醇萃取15%乙醇溶解的样品,其中70%左右的迷迭香酸仍然在乙醇水溶液中;正丁醇萃取水相溶解的样品,近70%的迷迭香酸分配在有机相。故选用水溶解迷迭香酸样品。
分别以不同pH的水相溶解含量为90%的迷迭香酸样品,用等体积正丁醇萃取,分相后,高效液相色谱法检测上下相,结果如下:
由试验数据可知:迷迭香酸在上下相的分配比在pH0.1~3时,98%以上的迷迭香酸分配在有机相。选择pH2~3的水相不仅可高效提取迷迭香酸,同时还可去除酸性条件下不溶于上相的杂质。
全部用酸水溶解,料液比1∶8,离心去除不溶物,分别用乙醚、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、三氯甲烷、正丁醇、石油醚、正己烷萃取按照1∶1的体积比进行萃取,共萃取两次,检测两次萃取后上相和最后的下相迷迭香酸的含量。其结果如下表3所示。
实验结果显示:用正丁醇萃取时,上相的迷迭香酸总和最高,其次是乙酸甲酯、乙酸乙酯和乙醚。萃取2次即可。
选用含量为5%的迷迭香酸粗品,用pH2~3的酸水溶解配制为1mg/mL样液,分别用等体积的正丁醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯和乙酸甲酯萃取后,测定所得产品的色度及迷迭香酸的含量,结果如下:
由表4结果可知:不同萃取剂萃取粗品含量从5.33%增加到12.21%~21.31%,用乙酸甲酯萃取效果最好。
选取500克含量5.33%粗品加pH=3的酸水7500mL(15倍)溶解,离心去沉淀,卷式膜过滤,闪蒸仪浓缩水相为2500mL。用正丁醇5000mL萃取两次,旋转蒸发器浓缩得迷迭香酸产品(色度为4127,含量约20%)。以该产品为原料,设计L9(34)的三因素三水平正交实验考察萃取剂种类、萃取水相的pH和萃取剂用量(为水相的倍数)对脱色率及含量的影响,萃取次数为1次。结果如下:
对上述结果进行方差分析,结果见下表:
经方差分析知,A因素对脱色率的影响为显著水平。B因素对含量影响为显著水平。综合指标A因素和B因素达到显著水平,应控制在最优水平,C因素不显著,可以在任意水平。选择的最佳水平组合为A1B2C1,即:乙酸甲酯萃取,水相pH为3,1.5倍体积萃取1次,迷迭香酸含量从20%提高到50%。
本文将含量为5%左右的迷迭香酸粗品用正丁醇萃取两次,用pH为3的酸水溶解经乙酸甲酯萃取后,所得产品中迷迭香酸含量达到50%以上,满足《GB1886.172—2016食品安全国家标准食品添加剂迷迭香提取物》要求,简化了工艺操作步骤,所用设备简单,且解决了迷迭香酸粗品颜色深而影响其在食品中的添加问题,可为企业工业化生产一定纯度的迷迭香酸产品提供参考。
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